ELISA試劑盒檢測關于特異性顯色詳細【白介素elisa試劑盒】

發布時間：2021/6/16 10:32:15 閱讀次數：1655

ELISA試劑盒對于間接ELISA標本一般都要進行稀釋,如果加樣不準就會造成誤差,尤其當稀釋倍數大時,很小的絕對誤差,會導致較大的相對誤差,使陰性（或弱陽性）標本呈陽性（或陰性）.加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產生氣泡.目前,大部分血站都已使用全自動酶免加樣系統處理標本,可較好地避免以上誤差.

在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復結果的關健一步,ELISA試劑盒應引起操作者重視.無論是手工操作還是機器操作,得出不正確的結果常與不正確的洗滌有關,ELISA就是靠洗滌來達到分離游離和結合的酶標記物的目的.通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質.

每種試劑都有其最佳反應模式,其中溫度和溫育時間控制是重要因素.因孵育溫度高,反應時間長,會造成整板本底高,陽性率高.溫育一般用濕盒或水浴,ELISA試劑盒反應板不宜疊放,以保證各板溫度都能迅速平衡,為避免蒸發,板上應加蓋.

作為記錄測定結果的儀器,酶標儀的性能穩定與否,決定結果的可靠度.首先酶標儀應定期進行保養,對濾光片要定期校正；其次酶標儀波長設置要正確,最好使用雙波長,一個檢測波長,一個參比波長,以消除微孔板底部劃痕不平指印或液面高度差異造成的光干擾.此外,在用酶標儀讀數時最好先擦試微孔板底部并壓平板條.由于各種酶標儀性能有所不同,使用中應詳細閱讀說明書

ELISA試劑盒綜上所述,盡管目前國際上以及我國有了部分標準血清或參比血清（血清盤）,但是酶聯免疫吸附技術目前在技術上尚未做到標準化.受方法學及技術條件的限制,在酶聯免疫吸附測定中有時不可避免的會出現一定的非特異性,ELISA試劑盒我們可以通過以上措施把非特異性顯色降至最低限底,從而提高檢測的特異性,并得到更準確可靠的實驗結果.

酶聯免疫吸附試驗（ELISA）自問世以來,以其敏感性高,特異性強,操作簡便安全,開創了免疫學診斷的新紀元在臨床診斷方面得到了廣泛的應用.但是ELISA試劑盒在它的研究生產及使用中常常會碰到非特異性顯色問題,ELISA試劑盒特異性檢驗標本中含酶標記物的干擾物,操作不當等因素都會導致這樣的結果.本文就在實驗過程中產生的一些原因及如何采取一些措施,消除非特異性顯色作以分析.

風濕因子（RF）黃疸等,類風濕因子是可作用于多種動物以及人IgGFc段的自身抗體,多數為IgM類,能充當抗原成分與固相及酶標抗體反應,從而呈現非特異性顯色.

黃疸血標本中常含有內源性過氧化物酶,如用辣根過氧化物酶為標記物,就有可能產生非特異性顯色.

常因樣品采集貯存處理不當造成如樣品溶血,被細菌污染,標本凝集不全等.溶血標本,紅細胞溶解破裂,釋放紅素形成,而血紅素中的鐵卟啉是過氧化物酶的類似物,以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色.如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP（辣根過氧化酶）,ELISA試劑盒有國內報道酶免HBsAg試劑檢測溶血標本時可造成假陽性.如在冰箱中保存過久,其中的IgG可發生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深.因此,血標本在采集處理時應小心,在冰箱中保存不易過久.

ELISA試劑盒標本凝集不全時,血清中會殘留部分纖維蛋白原,也易造成假陽性.

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